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微生物實驗中常見問題匯總

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培養基製備要求


培養基製備的質量將直接影響微生物生長。因為各種微生物對其營養要求不完全相同,培養目的的不同,各種培養基製備要求如下:


1.根據培養基配方的成分按量稱取,然後溶於蒸餾水中,在使用前對應用的試劑藥品應進行質量檢驗。


2.PH測定及調節:PH測定要在培養基冷至室溫時進行,因在熱或冷的情況下,其PH有一定差異,當測定好時,按計算量加入堿或酸混勻後,應再測試一次。培養基PH值一定要準確,否則會影響微生物的生長或影響結果的觀察。但需注意因高壓滅菌可影響一些培養基的PH降低或升高,故不宜滅菌壓力過高或次數太多,以免影響培養基 的質量,指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調完PH後再加入。


3.培養基需保持澄清,便於觀察細菌的生長情況,培養基加熱煮沸後,可用脫脂棉 花或絨布過濾,以除去沉澱物,必要時可用雞蛋白澄清處理,所用瓊脂條要預先洗淨晾幹後使用,避免因瓊脂含雜質而影響透明度。


4.盛裝培養基不宜用鐵、銅等容器,使用洗淨的中性硬質玻璃容器為好。


5.培養基的滅菌既要達到完全滅菌目的,又要注意不因加熱而降低其營養價值,一般12115min即可,如為含有不耐高熱物質的培養基如糖類、血清、明膠等,則應采用低溫滅菌或間歇法滅菌,一些不能加熱的試劑如亞碲酸鉀、卵黃、TTC、抗菌素等,待基礎瓊脂高壓滅菌後涼至50℃左右再加入。


6、每批培養基製備好後,應做無菌生長試驗及所檢菌株生長試驗。如果是生化培養基,使用標準菌株接種培養,觀察生化反應結果,應呈正常反應,培養基不應貯存過久,必要時可置4℃冰箱存放。


7、目前各種幹燥培養基較多,每批需用標準菌株進行生長試驗或生化反應觀察,各種培養基用相應菌株生長試驗良好後方可應用,新購進的或存放過久的幹燥培養基,在配製時也應測PH,使用時需根據產品說明書用量和方法進行。


8、每批製備的培養基所用化學試劑、滅菌情況及菌株生長試驗結果、製作人員等應做好記錄,以備查詢。

 

樣品采集及處理要求


1.所采集的檢驗樣品一定要具有代表性,采樣時應首先對該批食品原料、加工、運輸、貯藏方法條件、周圍環境衛生狀況等進行詳細調查,檢查是否有汙染源存在。


2.根據食品的種類及數量,采樣數量及方法應按標準檢驗方法的要求進行。


3.采樣應注意無菌操作,容器必須滅菌,避免環境中微生物汙染,容器不得使用煤 酚皂溶液,用新潔爾滅、酒精等消毒藥物滅菌,更不能含有此類消毒藥物或抗生素類藥物,以避免殺死樣品中的微生物,所用剪、刀、匙用具也需滅菌方可應用。


4.樣品采集後應立即送往檢驗室進行檢驗,送檢過程中一般不超過3h,如路程較遠,可保存在15℃環境中,如需冷凍者,則在凍存狀態下送檢。


5.檢驗室收到樣品後,進行登記(樣品名稱、送檢單位、數量、日期、編號等),觀察樣品的外觀,如果發現有下列情況之一者,可拒絕檢驗。
①樣品經過特殊高壓、煮沸或其他方法殺菌者,失去代表原食品檢驗意義者。
②瓶、袋裝食品已啟開者,熟肉及其製品、熟禽等食品已折碎不完整者,即失去原食品形狀者(食物中毒樣品除外)。
③按規定采樣數量不足者。
對送檢符合要求的樣品,檢驗室收到後,應立即進行檢驗,如果條件不具備,應置4℃冰箱存放,及時準備創造條件,然後進行檢驗。


6.樣品檢驗時,根據其不同性狀,進行適當處理。
①液體樣品接種時,應充分混合均勻,按量吸取進行接種。
②固體樣品,用滅菌刀、剪取其不同部位共25g,置於225ml 滅菌生理鹽水或其他溶液中,用均質器攪碎混勻後,按量吸取接種。
③瓶、袋裝食品應用滅菌操作啟開,根據性狀選擇上述方法處理後接種。

 

記錄和報告的要求


1.檢驗室收到樣品後,首先進行外觀檢驗,及時按照國家標準檢驗方法進行檢驗, 檢驗過程中要認真、負責、嚴格進行無菌操作,避免環境中微生物汙染。


2.樣品檢驗過程中所用方法、出現的現象和結果等均要用文字寫出試驗紀錄,以作為對結果分析、判定的依據,記錄要求詳細、清楚、真實、客觀、不得塗改和偽造。