谘詢熱線

010-62811616

北京幸运5网站首页有限責任公司

搜索
在線客服
客服熱線
010-62811616
服務時間:
8:30 - 17:30

公眾號

北京幸运5网站首页有限責任公司

地址:北京市海澱區馬連窪北路158號眾鼎商務401室
電話:010-62811616 62897573 62895970 51557187
傳真:010-62896002 62897573

郵箱:aobox_bio@163.com

微生物培養基配製與滅菌方法及步驟

瀏覽量

微生物培養基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養料。由於微生物具有不同的營養類型,對營養物質的要求也各不相同,加之研究的目的不同,所以培養基的種類很多,使用的原料也各有差異,但從營養角度分析,微生物培養基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外,培養基還應具有適宜的pH值、一定的緩衝能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。為了達到特定要求的研究,需要進行培養基配製和滅菌,那麽微生物培養基該如何配製與滅菌呢?

培養基製備

1.配製溶液

向容器內加入所需水量的一部分,按照培養基的配方,稱取各種原料,依次加入使其溶解,最後補足所需水分,對蛋白腖、肉膏等物質,需加熱溶解,加熱過程所蒸發的水分,應在全部原料溶解後加水補足。

配製固體培養基時,先將上述已配好的液體培養基煮沸,再將稱好的瓊脂加入,繼續加熱至完全融化.並不斷攪拌,以免瓊脂糊底燒焦。

2.調節pH

pH試紙(pH電位計、氫離子濃度比色計)測試培養基的pH,如不符合需要,可用10%HCl10%NaOH進行調節,直到調節到配方要求的pH值為止。

3.過濾

用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養基過濾.用紗布過濾時,最好折疊成六層,用濾紙過濾時,可將濾紙折疊成瓦棱形,鋪在漏鬥上過濾。

4.分裝

已過濾的培養基應進行分裝.如果要製作斜麵培養基,須將培養基分裝於試管中.如果要製作平板培養基或液體、半固體培養基,則須將培養基分裝於錐形瓶內。分裝時,一手捏鬆彈簧夾,使培養基流出,另一隻手握住幾支試管或錐形瓶,依次接取培養基。分裝時,注意不要使培養基粘附管口或瓶口,以免浸濕棉塞引起雜菌汙染。裝入試管的培養基量,視試管和錐形瓶的大小及需要而定.一般製作斜麵培養基時,每隻15×150毫米的試管,約裝34毫升(1/41/3試管高度),如製作深層培養基,每隻20×220毫米的試管約裝1215毫升。每隻錐形瓶裝入的培養基,一般以其容積的一半為宜。

5.加棉塞

分裝完畢後,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是過濾空氣,避免汙染.棉塞應采用普通新鮮、幹燥的棉花製作,不要用脫脂棉,以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用。製作棉塞時,要根據棉塞大小將棉花鋪展成適當厚度,揪取手掌心大小一塊,鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中,用右手食指插入棉花中部,同時左手食指與姆指稍稍緊握,就會形成1個長棒形的棉塞.棉塞作成後,應迅速塞入管口或瓶口中,棉塞應緊貼內壁不留縫隙,以防空氣中微生物沿皺折侵入。棉塞不要過緊過鬆,塞好後,以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。棉塞的2/3應在管內或瓶內,上端露出少許棉花便於拔取。塞好棉塞的試管和錐形瓶應蓋上厚紙用繩捆劄,準備滅菌。

6.製作斜麵培養基和平板培養基

培養基滅菌後,如製作斜麵培養基和平板培養基,須趁培養基未凝固時進行。

(1)製作斜麵培養基。在實驗台上放1支長0.51米左右的木條,厚度為1厘米左右,將試管頭部枕在木條上,使管內培養基自然傾斜,凝固後即成斜麵培養基。

(2)製作平板培養基。將剛剛滅過菌的盛有培養基的錐形瓶和培養皿放在實驗台上,點燃酒精燈,右手托起錐形瓶瓶底,左手拔下棉塞,將瓶口在酒精燈上稍加灼燒,左手打開培養皿蓋,右手迅速將培養基倒入培養皿中,每皿約倒入10毫升,以鋪滿皿底為度.鋪放培養基後放置15分鍾左右,待培養基凝固後,5個培養皿一疊,倒置過來,平放在恒溫箱裏,24小時後檢查,如培養基末長雜菌,即可用來培養微生物。

 

微生物檢查培養基常用的滅菌方法

 

1、濕熱滅菌:

蒸汽在冷凝時釋放出大量潛能,並且蒸汽具有強大穿透力,蒸汽的濕熱破壞菌體蛋白質和核酸的化學鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙而死亡。濕熱滅菌的效果,取決於致死溫度和致死時間。致死溫度是殺滅微生物的極限溫度。致死時間是在致死溫度下殺滅全部微生物所需時間。

 

高壓蒸汽滅菌適合於耐高溫培養基、接種器械和蒸餾水的滅菌。培養基分裝後應立即滅菌,應在當天內完成滅菌工作,不可過夜。消毒時間不宜過長,也不能超過規定的壓力範圍,否則有機物質就會在高溫下分解,失去營養作用,也會使培養基變質、變色,甚至難以凝固。

 

培養基配製後,應按驗證過的高壓滅菌程序滅菌。2015版《中國藥典》第三次公示稿,1106 非無菌產品微生物限度檢查:控製菌檢查法中,列出部分培養基的滅菌條件,如下表所示:

培養基名稱

滅菌條件

腸道菌增菌液體培養基

加熱至100 30分鍾,立即冷卻

紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養基

加熱煮沸(不能在高壓滅菌器中加熱)

RV 沙門菌增菌液體培養基

滅菌溫度不能超過115

木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂培養基

加熱至沸騰(不能在高壓滅菌器中加熱)

其他未明確標示滅菌方法的培養基,按供應商標簽所示滅菌方法滅菌或按驗證過的高壓滅菌程序滅菌。

 

2、過濾除菌:

一些抗生素及有機物等,遇熱容易分解,不能與培養基一起進行高溫滅菌,而要使用細菌過濾器濾去其中的雜菌,例如含抗生素的沙氏葡萄糖瓊脂培養基。過濾後的溶液要立即加入培養基中,若為液體培養基,可在培養基冷卻至30℃時加入;若為固體培養基,必須在培養基凝固之前(50-60℃)加入,振蕩使溶液與其他成分混合均勻。

 信息來源:食品微生物檢測 公眾號